Оптимизация способа получения богатой тромбоцитами плазмы для использования в клинической практике

АКТУАЛЬНОСТЬ В настоящее время идет активный поиск и разработка эффективных биопрепаратов на основе тромбоцитов человека, предназначенных для использования в регенеративной медицине. Исходным материалом для получения биопрепаратов является богатая тромбоцитами плазма (БоТП), при этом методика выделения БоТП до сих пор не стандартизирована.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Оценить качество тромбоцитов в БоТП, выделенной при разных режимах центрифугирования.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ В качестве источника тромбоцитов использовали кровь доноров-добровольцев. Для выделения БоТП использовали три методики, каждая из методик включала 2-этапное центрифугирование: в течение 5 мин с ускорением 300 g и 17 мин с ускорением 700 g (1-я группа); в течение 10 мин с ускорением 300 g и 10 мин с ускорением 700 g (2-я группа); в течение 15 мин с ускорением 300 g и 5 мин с ускорением 700 g (3-я группа). Тромбоциты исследовали с помощью способа оценки морфофункционального статуса тромбоцитов, основанного на витальном окрашивании клеток.

РЕЗУЛЬТАТЫ Было показано, что в образцах БоТП 1-й и 2-й групп общая сохранность биологически полноценных тромбоцитов была сходной и составляла 55–60% от их общего содержания в крови. В 3-й группе сохранность биологически полноценных тромбоцитов составила лишь 30% (р<0,05, статистически значимо).

ВЫВОДЫ Режимы центрифугирования в течение 5 мин с ускорением 300 g / 17 мин с ускорением 700 g и 10 мин с ускорением 300 g / 10 мин с ускорением 700 g позволяют получить БоТП равного качества; вместе с тем режим центрифугирования в течение 10 мин 300 g / 10 мин 700 g имеет ряд инструментальных преимуществ.

1. Kushida S, Kakudo N, Morimoto N, Hara T, Ogawa T, Mitsui T, et al. Platelet and growth factor concentrations in activated platelet-rich plasma: a comparison of seven commercial separation systems. J Artif Organs. 2014;17(2):186–192. PMID: 24748436 https://doi:10.1007/s10047-014-0761-5

2. Patel S, Dhillon MS, Aggarwal S, Marwaha N, Jain A. Treatment with platelet-rich plasma is more effective than placebo for knee osteoarthritis: a prospective, double-blind, randomized trial. Am J Sports Med. 2013;41(2):356–364. PMID: 23299850 https://doi:10.1177/0363546512471299

3. Lacci KM, Dardik A. Platelet-rich plasma: support for its use in wound healing. Yale J Biol Med. 2010;83(1):1–9. PMID: 20351977

4. Yassibag-Berkman Z, Tuncer O, Subasioglu T, Kantarci A. Combined use of platelet-rich plasma and bone grafting with or without guided tissue regeneration in the treatment of anterior interproximal defects. J Periodontol. 2007;78(5):801–809. PMID: 17470012 https://doi:10.1902/jop.2007.060318

5. Макаров М.С., Сторожева М.В., Конюшко О.И., Боровкова Н.В., Хватов В.Б. Влияние концентрации тромбоцитарного фактора роста на пролиферативную активность фибробластов человека. Клеточные технологии в биологии и медицине. 2013;(2):111–115.

6. Etulain J, Mena HA, Meiss RP, Frechtel G, Gutt S, Negrotto S, et al. An optimised protocol for platelet-rich plasma preparation to improve its angiogenic and regenerative properties. Sci Rep. 2018;8(1):1513. PMID: 29367608 https://doi:10.1038/s41598-018-19419-6

7. Amable PR, Carias RB, Teixeira MV, da Cruz Pacheco I, Corrêa do Amaral RJ, Granjeiro JM, et al. Platelet-rich plasma preparation for regenerative medicine: optimization and quantification of cytokines and growth factors. Stem Cell Res Ther. 2013;4(3):67. PMID: 23759113 https://doi:10.1186/scrt218

8. Degen RM, Bernard JA, Oliver KS, Dines JS. Commercial Separation Systems Designed for Preparation of Platelet-Rich Plasma Yield Differences in Cellular Composition. HSS J. 2017;13(1):75–80. PMID: 28167878 https://doi:10.1007/s11420-016-9519-3

9. Croisé B, Paré A, Joly A, Louisy A, Laure B, Goga D. Optimized centrifugation preparation of the platelet rich plasma: Literature review. J Stomatol Oral Maxillofac Surg. 2020;121(2):150–154. PMID: 31299341 https://doi:10.1016/j.jormas.2019.07.001

10. Хубутия М. Ш., Макаров М.С., Хватов В.Б., Высочин И.В., Кобзева Е.Н., Боровкова Н.В. и др. Способ оценки морфофункционального статуса тромбоцитов человека: Патент № 2485502C1; заявл. 17.02.2012; опубл. 20.06.2013. Бюллетень №17.URL: https://patentimages.storage.googleapis.com/db/51/6f/194ae2d17f6f8b/RU2485502C1.pdf [Дата обращения: 21.04.2023]

11. Макаров М.С., Кобзева Е.Н., Высочин И.В., Боровкова Н.В., Хватов В.Б. Применение витального окрашивания для морфофункционального анализа тромбоцитов человека короткого хранения. Альманах клинической медицины. 2014;(30):83–87.

12. Козинец Г.И. (ред.) Практическая трансфузиология. Москва: Практическая медицина; 2005.

13. Рагимов А.А. (ред.) Трансфузиология. Национальное руководство. Москва: ГЭОТАР-Медиа; 2012.

14. Муравьев А.В., Михайлов П.В., Тихомирова И.А. Микроциркуляция и гемореология: точки взаимодействия. Регионарное кровообращение и микроциркуляция. 2017;16(2):90–100. https://doi.org/10.24884/1682-6655-2017-16-2-90-100

15. Максимович Н.Е., Ходосовский М.Н., Троян Э.И., Лелевич А.В., Рукан Т.А., Максимович Е.Н. Патологическая физиология: пособие для студентов. 2-е изд., доп. и перераб. Гродно: ГрГМУ; 2014.

16. Боровкова Н.В., Малыгина М.А., Макаров М.С. Сахарова О.М., Пономарев И.Н. Способ лечения пациентов с переломом шейки плеча: Патент № 2681753 С1; заявл. 21.05.2018; опубл. 12.03.2019. Бюллетень № 8. URL: https://www.elibrary.ru/download/elibrary_37357934_81969735.PDF [Дата обращения 21.04.2023]