nmpЖурнал им. Н.В. Склифосовского «Неотложная медицинская помощь»Russian Sklifosovsky Journal "Emergency Medical Care"2223-90222541-8017“N.V. Sklifosovsky Research Institute for Emergency Medicine”10.23934/2223-9022-2018-7-4-319-324nmp-532Research ArticleОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИORIGINAL ARTICLESХимико-токсикологическая диагностика острых отравлений феназепамомChemical and Toxicological Diagnosis of Acute Poisonings with Phenazepamhttps://orcid.org/0000-0002-0861-5945БеловаМ. В.BelovaM. V.

Белова Мария Владимировна - доктор биологических наук, доцент, ведущий научный сотрудник отделения острых отравлений и соматопсихиатрических расстройств НИИ СП им. Н.В. Склифосовского ДЗМ.

129090 Москва, Б. Сухаревская пл., д. 3; 119991 Москва, ул. Большая Пироговская, д. 2, стр. 4

Belova Maria Vladimirovna - Docent, Doctor of Biological Sciences Leading Researcher N.V. Sklifosovsky RIEM, Associate professor I.M. Sechenov FM SMU.

3 Bolshaya Sukharevskaya Square, Moscow 129090; 2 Bolshaya Pirogovskaya St., b. 4, Moscow 119991

maniabel@gmail.comКлюевЕ. А.KlyuyevE. A.

Клюев Евгений Александрович - врач клинической лабораторной диагностики, отделение острых отравлений и соматопсихиатрических расстройств

129090 Москва, Б. Сухаревская пл., д. 3

Klyuyev Evgeny Aleksandrovich - Clinical Laboratory Physician.

3 Bolshaya Sukharevskaya Square, Moscow 129090

https://orcid.org/0000-0002-8993-4808МельниковЕ. С.MelnikovE. S.

Мельников Евгений Сергеевич - кандидат фармацевтических наук, ассистент кафедры фармацевтической и токсикологической химии им. А. П. Арзамасцева.

119991 Москва, ул. Большая Пироговская, д. 2, стр. 4

Melnikov Evgeny Sergeyevich - Candidate of Pharm. Sci., Assistant of the Department of Pharmaceutical and Toxicological Chemistry.

2 Bolshaya Pirogovskaya St., b. 4, Moscow 119991

ЕлисееваД. М.YeliseyevaD. M.

Елисеева Дарья Михайловна - студентка Института фармации.

119991 Москва, ул. Большая Пироговская, д. 2, стр. 4

Yeliseyeva Daria Mikhaylovna - student of Pharmacy Faculty, Department of Pharmaceutic and Toxicological Chemistry

2 Bolshaya Pirogovskaya St., b. 4, Moscow 119991

ГБУЗ «НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. Москвы; ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РоссииРоссияN.V. Sklifosovsky Research Institute for Emergency Medicine of the Moscow Healthcare Department; I.M. Sechenov First Moscow State Medical UniversityRussian FederationГБУЗ «НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского Департамента здравоохранения г. МосквыРоссияN.V. Sklifosovsky Research Institute for Emergency Medicine of the Moscow Healthcare DepartmentRussian FederationФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава РоссииРоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical UniversityRussian Federation20182801201974319324Copyright © Белова М.В., Клюев Е.А., Мельников Е.С., Елисеева Д.М., 20192019Белова М.В., Клюев Е.А., Мельников Е.С., Елисеева Д.М.Belova M.V., Klyuyev E.A., Melnikov E.S., Yeliseyeva D.M.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.jnmp.ru/jour/article/view/532Актуальность

Актуальность. Относительная доступность феназепама делает его частой причиной передозировок, суицидов и немедицинского использования. В то же время он остается недостаточно изученным в химикотоксикологическом отношении. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Создание доступной экспрессной методики обнаружения феназепама в биологических средах пациентов с острым отравлением им.

Материал и методы

Материал и методы. Использовали методы тонкослойной хроматографии (ТСХ), газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-МС), высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС), иммунохроматографический анализ (ИХА). Пробоподготовка образцов интактной мочи с добавлением стандартных растворов феназепама и реальных образцов мочи пациентов с острыми отравлениями феназепамом проводилась методами жидкость-жидкостной экстракции или осаждения сопутствующих компонентов пробы ацетонитрилом, а также добавляли стадии гидролиза и дериватизации при анализе методом ГХ-МС.

Результаты

Результаты. Анализ статистики отделения острых отравлений НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского за 2014–2016 гг. показал, что отравления феназепамом составляют в среднем 9,2% от всего числа поступлений и совершаются преимущественно с суицидальной целью. Разработана методика обнаружения феназепама методом ТСХ, которая дает более объективные результаты, чем ИХА. Для подтверждающего анализа целесообразно использовать метод ВЭЖХ-МС/МС по нативному веществу и ГХ-МС по продуктам гидролиза после дериватизации. По сравнению с подтверждающими методами разработанная методика ТСХ-скрининга обладает экспрессностью, не требует использования дорогостоящего высокотехнологичного оборудования, трудоемкой пробоподготовки, позволяет достоверно выявлять феназепам в моче с концентрацией свыше 1 мкг/мл (предел обнаружения методики).

Background

Background. The relative availability of Phenazepam makes it a frequent cause of overdose, suicide and non-medical use. At the same time, it remains insufficiently studied in chemical and toxicological terms.

The aim of study

The aim of study. to create an accessible, rapid method for detecting Phenazepam in biological matrices of patients with acute poisoning.

Materials and methods

Materials and methods. We used thin-layer chromatography (TLC), gas chromatography with a mass selective detector (GC-MS), high performance liquid chromatography with a tandem mass-selective detector (LC-MS/MS) and immunochromatographic analysis (ICA). The preparation of samples of intact urine with the addition of standard solutions of Phenazepam and real urine samples of patients with acute poisoning with Phenazepam was carried out using liquid-liquid extraction or precipitation of related components of the sample with acetonitrile. Hydrolysis and derivatization were also added in GC-MS analysis.

Results

Results. The analysis of statistics of the Department of Acute Poisonings of the N.V. Sklifosovsky Research Institute for Emergency Medicine in 2014-2016 showed that Phenazepam poisonings averaged 9.2% of the total number of admissions and mainly occurred as suicidal attempts. A technique has been developed for the detection of Phenazepam by TLC, which gives more objective results than ICA. For confirmatory analysis, it is advisable to use LC-MS/MS method for the native substance and GC-MS for the products of hydrolysis after derivatization. Compared to confirmatory methods, the developed TLC-screening technique is expressive, does not require the use of expensive high-tech equipment, difficult sample preparation, and makes it possible to reliably detect toxic and lethal concentrations of Phenazepam.

феназепамострые отравлениятонкослойная хроматографияиммунные методыВЭЖХ-МС/МСГХ-МСphenazepamacute poisoningthin-layer chromatographyimmune analysisHPLC-MS/MSGC-MSReferencesАведисова А.С. К вопросу о зависимости к бензодиазепинам. Психиатрия и психофармакотерапия. 1999; (1): 12–15.Avedisova A.S. On the issue of dependence on benzodiazepines. Psikhiatriya i psikhofarmakoterapiya. 1999; (1): 12-15. (In Russian).Феназепам. Электронный ресурс. URL: http://www.netnarkotik.ru/fenazepam (13.02.2018)Phenazepam. Available at: http://www.netnarkotik.ru/fenazepam (Accessed 13 Feb 2018) (In Russian).В России озаботились статистикой применения феназепама «без назначения». Электронный ресурс. URL: https://regnum.ru/news/2356075.html (13.02.2018)In Russia preoccupied statistics application fenazepama “without appointment”. Available at: https://regnum.ru/news/2356075.html (Accessed 13 Feb 2018) (In Russian).Карташов В.А., Чернова Л.В., Величко Г.П. ТСХ-скрининг и индексы удерживания токсических веществ. Новые технологии. 2012; (2): 240–247.Kartashov V.A., Chernova L.V., Velichko G.P. TLC-screening and toxic substances retention indices. Novyye tekhnologii. 2012; (2): 240-247. (In Russian).Поспелова А.А., Карпова Л.Н., Малкова Т.Л. Оценка возможности использования обращенно-фазной тонкослойной хроматографии в химико-токсикологических исследованиях ряда групп лекарственных и химических соединений. Токсикологический вестник. 2012; (2): 20–23.Pospelova A.A., Karpova L.N., Malkova T.L. The estimation of a possible use of reversed-phase thin-layer chromatography in chemo-toxicological studies of certain groups of pharmaceutical and chemical compounds. Toksikologicheskiy vestnik. 2012; (2): 20-23. (In Russian).Saitman A., Park H.D., Fitzgerald R.L. False-positive interferences of common urine drug screen immunoassays: a review. J. Analytic. Toxicol. 2014; 38(7): 387–396. PMID: 24986836. DOI: 10.1093/jat/bku075.Saitman A., Park H. D., Fitzgerald R. L. False-positive interferences of common urine drug screen immunoassays: a review. JAnalytic Toxicol. 2014; 38(7): 387-396. PMID: 24986836. DOI: 10.1093/jat/bku075.Mikel C., Pesce A.J, Rosenthal M., West C. Therapeutic monitoring of benzodiazepines in the management of pain: current limitations of point of care immunoassays suggest testing by mass spectrometry to assure accuracy and improve patient safety. Clin. Chim. Acta. 2012; 413(15– 16): 1199–1202. PMID: 22484396. DOI: 10.1016/j.cca.2012.03.017.Mikel C., Pesce A.J, Rosenthal M., West C. Therapeutic monitoring of benzodiazepines in the management of pain: current limitations of point of care immunoassays suggest testing by mass spectrometry to assure accuracy and improve patient safety. Clin Chim Acta. 2012; 413(15-16): 11991202. PMID: 22484396. DOI: 10.1016/j.cca.2012.03.017.Bertol E., Vaiano F., Borsotti M., et al. Comparison of immunoassay screening tests and LC–MS-MS for urine detection of benzodiazepines and their metabolites: results of a national proficiency test. J. Analytic. Toxicol. 2013; 37(9): 659–664. PMID: 23943436. DOI: 10.1093/jat/bkt063.Bertol E., Vaiano F., Borsotti M., et al. Comparison of immunoassay screening tests and LC-MS-MS for urine detection of benzodiazepines and their metabolites: results of a national proficiency test. J Analytic Toxicol. 2013; 37(9): 659-664. PMID: 23943436. DOI: 10.1093/jat/bkt063.Yegles M., Mersch F., Wennig R. Detection of benzodiazepines and other psychotropic drugs in human hair by GC/MS. Forens. Sci. Int. 1997; 84(1–3): 211–218.Yegles M., Mersch F., Wennig R. Detection of benzodiazepines and other psychotropic drugs in human hair by GC/MS. Forens Sci Int. 1997; 84(1-3): 211-218.Maurer H., Pfleger K. Identification and differentiation of benzodiazepines and their metabolites in urine by computerized gas chromatography– mass spectrometry. J. Chromatogr. B: Biomed. Sci. Applicat. 1987; 422: 85–101. PMID: 3437028.Maurer H., Pfleger K. Identification and differentiation of benzodiazepines and their metabolites in urine by computerized gas chromatography— mass spectrometry. J Chromatogr. 1987; 422: 85-101. PMID: 3437028.Valentine J.L., Middleton R., Sparks C. Identification of urinary benzodiazepines and their metabolites: comparison of automated HPLC and GC-MS after immunoassay screening of clinical specimens. J. Analytic. Toxicol. 1996; 20(6): 416–424. PMID: 8889678.Valentine J.L., Middleton R., Sparks C. Identification of urinary benzodiazepines and their metabolites: comparison of automated HPLC and GC-MS after immunoassay screening of clinical specimens. J Analytic Toxicol. 1996; 20(6): 416-424. PMID: 8889678.Kratzsch C., Tenberken O., Peters F.T., et al. Screening, library–assisted identification and validated quantification of 23 benzodiazepines, flumazenil, zaleplone, zolpidem and zopiclone in plasma by liquid chromatography/mass spectrometry with atmospheric pressure chemical ionization. J. Mass Spectrom. 2004; 39(8): 856–872. PMID: 15329838.Kratzsch C., Tenberken O., Peters F.T., et al. Screening, library-assisted identification and validated quantification of 23 benzodiazepines, flumazenil, zaleplone, zolpidem and zopiclone in plasma by liquid chromatography/mass spectrometry with atmospheric pressure chemical ionization. J Mass Spectrom. 2004; 39(8): 856-872. PMID: 15329838.Quintela O., Sauvage F.L., Charvier F., et al. Liquid chromatography– tandem mass spectrometry for detection of low concentrations of 21 benzodiazepines, metabolites, and analogs in urine: method with forensic applications. Clin. Chem. 2006; 52(7): 1346–1355. PMID: 16709625. DOI: 10.1373/clinchem.2005.065631.Quintela O., Sauvage F.L., Charvier F., et al. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for detection of low concentrations of 21 benzodiazepines, metabolites, and analogs in urine: method with forensic applications. Clin Chem. 2006; 52(7): 1346-1355. PMID: 16709625. DOI: 10.1373/clinchem.2005.065631.Белова М.В., Лисовик Ж.А., Клюев А.Е., Колдаев А.А., Остапенко Ю.Н. Химико-токсикологический анализ острых химических отравлений. М.: Графикон Принт, 2007: 66–67: 75–79.Belova M.V., Lisovik Zh.A., Klyuyev A.E., et al. Chemical-toxicological analysis of acute chemical poisoning. Moscow: Grafikon Print, 2007: 66-67, 75-79. (In Russian).Арзамасцев А.П., Раменская Г.В., Родионова Г.М., Кузнецова Н.И., Петухов А.Е. ТСХ-скрининг токсикологически значимых соединений, изолируемых экстракцией и сорбцией. М. ГЭОТАР-Mедиа, 2010: 128–132.Arzamastsev A.P., Ramenskaya G.V., Rodionova G.M., Kuznetsova N.I., Petukhov A.E. TLC screening of toxicologically significant compounds, isolated by extraction and sorption. Moscow: GEOTAR-Media Publ., 2010: 128-132. (In Russian).Rust K. Y., Baumgartner M.R., Meggiolaro N., Kraemer T. Detection and validated quantification of 21 benzodiazepines and 3 “z-drugs” in human hair by LC–MS/MS //Forensic science international. 2012; 215(1–3): 64–72.Rust K. Y., Baumgartner M.R., Meggiolaro N.Kraemer T. Detection and validated quantification of 21 benzodiazepines and 3 “z-drugs” in human hair by LC-MS/MS //Forensic science international. 2012; 215(1-3): 64-72.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.